聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩效应(Polyacrylamide Gel Electrophoresis Concentration Effect)是一种用于浓缩和富集蛋白质样品的方法。下面将详细介绍其原理和操作步骤。
1. 原理：
聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩效应是基于电泳过程中离子迁移速率的差异而产生的。当直流电场施加到聚丙烯酰胺凝胶上时，带电蛋白质会在电场作用下向电极方向迁移。与此同时，在凝胶孔隙中存在着小分子物质(如盐离子)，这些小分子物质也受到电场作用向电极方向迁移。然而，由于离子的迁移速率比蛋白质快得多，这些小分子物质形成了一个扩散层，导致在凝胶孔隙周围形成了高浓度的小分子物质区域。
2. 操作步骤：
聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩效应通常在水平电泳装置中进行。以下是具体的操作步骤：
a. 准备样品：
将待浓缩的蛋白质样品加入适量的电泳样品缓冲液中，使其浓度适当。也可以在样品中添加少量的SDS(十二烷基硫酸钠)和还原剂，以解离和变性蛋白质。
b. 制备凝胶：
准备聚丙烯酰胺凝胶并注入到电泳槽中。根据需要，可以选择不同浓度或孔隙度的凝胶。通常，较低浓度的凝胶用于浓缩大分子量的蛋白质，而较高浓度的凝胶用于浓缩小分子量的蛋白质。
c. 添加电泳缓冲液：
向电泳槽中加入足够的电泳缓冲液，使其液面能够完全覆盖凝胶，同时保持凝胶湿润。
d. 加载样品：
使用微量吸管或其他适当的装载方式，在凝胶上方的凹槽或凹口中缓慢地加载样品。注意不要让样品直接接触到凝胶。
e. 施加电场：
将正负电极分别连接到电泳槽的两端，逐渐施加适当的直流电场。根据蛋白质的特性和需要，可以选择不同的电场强度和持续时间。
f. 进行浓缩：
在电泳过程中，蛋白质在电场作用下向电极迁移，而小分子物质则形成扩散层富集在凝胶孔隙周围。根据所需的浓缩效果，可以调整电泳时间。
g. 完成电泳：
达到所需的浓缩程度后，关闭电源，停止电泳。注意不要让样品干燥，以免破坏蛋白质。
h. 提取浓缩样品：
使用吸管或其他合适的方式，小心地从凝胶孔隙中提取浓缩的样品。这些样品可以用于进一步的分析、检测或其它实验。
聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩效应是一种简单、快速、无需特殊设备的浓缩方法。通过调整电泳条件和凝胶特性，可以实现对特定分子量范围内蛋白质的选择性浓缩和富集。该方法被广泛应用于生物化学、分子生物学、蛋白质组学等领域的研究中。
